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实时荧光定量PCR(real-time PCR)作为普通PCR的一项改进，随着分子技术的发展，在基因表达谱分析，基因定量分析，基因检测，SNP分析等多方面受到广泛应用。
它的原理是在 PCR反应体系中加入荧光基因，利用荧光信号累积实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析，具有灵敏度高，特异性强的特点。由于实时荧光定量PCR的这些特点，因此在操作中要特别的细致，每一个细节都可能影响到最终结果。
荧光定量PCR有多种方法，包括 Taqman探针法，分子信标法，SYBR Green法，LUX Primers法等，目前实验室一般采用SYBR Green法。
提高荧光定量PCR实验效率和数据精准，需要注意一下几点：
A.实验前的准备 实验开始前要计算好要配的体系，样品布局，选择一个光线较暗，比较安静的环境进行实验操作。
B.实验中 每一个混合体系都要充分混匀，这一步非常重要，建议使用振动仪混匀，效果好了很多。特别注意一下，在将混合物分到PCR板的时候，吸头要吸打干净，不能有气泡，确保每个样品的重复间一致性。实验中要注意时间，不可太长，否则，时间一长荧光效果可能会降低。
C.实验后分析 实验后及时整理分析数据，从扩增曲线，Ct值等方面总结实验结果，为以后的实验提供借鉴和进一步的改进。
